童年的一起突发事件，令彼得·帕克（安德鲁·加菲尔德饰）和父母生离死别转眼彼得成为一名高中生，他偶然发现父亲的公文包，并从叔父本·帕克（马丁·希恩饰）处得到线索，于是启程前往奥斯库公司拜访父亲当年的合作伙伴——科特·康纳斯博士（瑞斯·伊凡斯饰）。在公司内四处寻找线索的彼得意外被蜘蛛咬了一口，回程途中他的身体发生奇异的变化。在康纳斯博士的引导下，彼得不断了解并发掘体内超乎寻常的能力，各种意想不到的事情迅速向他袭来。直到某日，他便成了影响深远的超级战士蜘蛛侠。　　而城市内也出现了凶恶的蜥蜴人，彼得不平凡的人生就此展开……